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我组非天然辅酶研究取得重要进展
时间:2021-04-12    栏目:新闻动态

近日,我组在非天然辅酶研究领域取得重要进展,创制了烟酰胺胞嘧啶二核苷酸(NCD)合成酶和NCD自给的微生物表型,并成功用于构建高选择性物质代谢途径。研究成果已在Nature Communications发表。

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)是胞内不可或缺的辅酶,广泛参与代谢等过程,因此改变NAD水平导致的生物学效应难以预测。为突破调控天然辅酶的局限,团队开创基于非天然辅酶的合成生物学研究。前期工作中,设计合成了NCD,采用半理性设计及定向进化策略,改造苹果酸酶、乳酸脱氢酶、亚磷酸脱氢酶和甲酸脱氢酶,均获得了NCD偏好型突变体(J. Am. Chem. Soc., 2011;通过解析晶体结构,揭示了辅酶偏好性改变的分子基础(ACS Catal., 2019);以大肠杆菌为宿主,通过表达核苷酸转运蛋白和NCD偏好型氧化还原酶,成功实现NCD介导的高选择性能量传递 (ACS Catal., 2017Angew. Chem. Int. Ed., 2020)。然而,微生物难以从环境中有效摄取NCD,亟需解决胞内NCD供给问题。

本研究以烟酸单核苷酸(NaMN)腺苷酰转移酶(NadD)为模板,半理性设计并改造其底物NaMNATP的结合口袋,获得偏好烟酰胺单核苷酸(NMN)和胞嘧啶核苷三磷酸(CTP)的突变体,即NCD合成酶(NcdS)。在大肠杆菌中表达NcdS,实现利用内源的CTPNMN合成NCD;通过强化前体合成步骤,胞内NCD含量可超过天然辅酶,达5.0 mM,建立了NCD自给的微生物表型。更进一步,通过表达NCD偏好型苹果酸酶和D-乳酸脱氢酶,实现NCD介导的L-苹果酸高选择性转化为D-乳酸。该工作为胞内合成非天然辅酶奠定了基础,将有力推进后续合成生物学和化学生物学研究。

  该工作得到国家重点研发计划、国家自然科学基金和大连化物所创新基金等资助。 (文/图 王雪颖)


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