仪器工作原理及组成: Illumina公司在2010年推出它的第一款定量PCR仪——Eco实时荧光定量PCR仪。 与常规的加热模块不同,Eco实时荧光定量PCR仪的导热元件是一个中空银槽(表面镀金),密闭中空银槽内含一种特殊液体导热介质。在PCR循环过程中,液体导热介质通过两个反方向搅拌装置驱动,在中空银槽中快速流动,使热量从半导体均匀传递到整个银槽。这种设计大大消除了孔间的温度差异和孔板的边缘效应,孔间温度均一性可以达到±0.1℃。 Eco实时荧光定量PCR仪还包含一套先进的、高性能的光学检测系统,能实现准确、灵敏的荧光信号检测。每循环48个样品孔,均可以四通道实时检测。激发端采用两个不同波长的固定式48LED阵列(452-486 nm,542-582 nm),两个LED阵列分别位于样品板的两端,激发光经过反射镜到达样品,每个LED光源对应48孔样品板的每个样品孔,保证激发光路径完全相同。每孔均同时激发,最大程度减少孔间干扰,保证实验结果的真实性。检测端为四个发射滤光片(505-545 nm, 562-596 nm,604-644 nm,665-605 nm)通过一个线性滑动滤光片架进行转换,高性能CCD实时检测每个循环每个孔的荧光信号,防止数据的丢失,并且可以在实验完成后进行样品编辑。 Eco完全满足MIQE ( The Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments)准则,该系统配套的软件是集成式软件,包含机器控制,数据采集,分析图表等功能,简洁明了,友好易用。
应用范围: 1. 通过建立标准曲线进行基因表达绝对定量; 2. △△Cq法进行相对定量,可以对多个参照基因定标; 3. 利用探针法做等位基因突变点分析; 4. 基因突变筛查及HRM分析。
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